اختبار سريع للفيروسات الغدية - إفراز الأنف
SARS-CoV -2 طقم اختبار الحمض النووي يتم تطبيقه على الاكتشاف النوعي للحمض النووي لـ COVID -19 في مسحات البلعوم والأنف والبلعوم والبلغم. توفر نتائج الاختبار أساس التشخيص الجزيئي للعدوى أو المرضى المشتبه بهم ، ولا ينبغي استخدامها كمعيار وحيد للتشخيص السريري.
الوصف
الاستخدام المقصود:
SARS-CoV -2 طقم اختبار الحمض النووي يتم تطبيقه على الاكتشاف النوعي للحمض النووي لـ COVID -19 في مسحات البلعوم والأنف والبلعوم والبلغم. توفر نتائج الاختبار أساس التشخيص الجزيئي للعدوى أو المرضى المشتبه بهم ، ولا ينبغي استخدامها كمعيار وحيد للتشخيص السريري.
المواد:
ميترالات | تحديد | لون الغطاء | تكوين |
COVID {0}} مزيج ردود الفعل | 1165 ميكرولتر × 1 أنبوب | بني | العازلة ، dNTPs ، الاشعال ، المسابر. |
COVID -19 مزيج إنزيمات | 85 ميكرولتر × 1 أنبوب | أزرق | بوليميريز DNA Taq ، النسخ العكسي ، UDG |
مراقبة إيجابية | 200 ميكرولتر × 1 أنبوب | الأصفر | الفيروس الكاذب للجين الهدف و IC |
سيطرة سلبية | 200 ميكرولتر × 1 أنب | عديم اللون | ddH2O |
إجراء الاختبار:
أ. تحضير العينة
الحمض النووي الريبي المستخرج هو مادة البداية لمجموعة اختبار الحمض النووي SARS-CoV -2.
هام: يجب إجراء كل إجراء لاستخراج الحمض النووي في وقت واحد باستخدام تحكم إيجابي واحد (40 ميكرولتر ، مخفف بمحلول ملحي معقم / PBS إلى الحجم المطلوب) وضبط سلبي واحد (40 ميكرولتر ، مخفف بمحلول ملحي معقم / PBS إلى الحجم المطلوب).
يوصى باستخدام مجموعات استخلاص الحمض النووي التجارية التالية: PureLink TM Viral RNA / DNA Mini Kit (Invitrogen) ؛ مجموعة صغيرة من الحمض النووي الريبي الفيروسي (QIAGEN) ؛ مجموعة TIANamp Hi-DNA / RNA (TIANGEN) ؛
ب. إعداد مزيج التفاعل
1. يجب إذابة جميع الكواشف والعينات تمامًا وخلطها تمامًا وطردها مركزيًا لفترة وجيزة في درجة حرارة الغرفة (النطاق التقريبي 18 إلى 25 درجة) قبل الاستخدام.
2. قم بإعداد الحجم المطلوب من خليط التفاعل في أنبوب طرد مركزي دقيق من البولي بروبيلين بحجم مناسب.
3. ماصة 25 ميكرولتر من خليط التفاعل في كل بئر مطلوب من 96- لوحة تفاعل بئر بصري مناسب أو أنبوب تفاعل ضوئي مناسب.
جيم إضافة قالب
1. إضافة 5 ميكرولتر من الحمض النووي الريبي المستخرج من العينات / التحكم الإيجابي / التحكم السلبي. الحجم الإجمالي 30 ميكرولتر.
إعداد رد الفعل | |
COVID {0}} مزيج ردود الفعل | 23.3µL |
COVID -19 مزيج إنزيمات | 1.7 µL |
العينات أو الضوابط | 5 µL |
الحجم الكلي | 30µL |
2. قم بخلط العينات وعناصر التحكم بدقة مع خليط التفاعل عن طريق الماصات لأعلى ولأسفل / دوامة.
3. أغلق 96- لوحة تفاعل البئر بالأغطية المناسبة أو الفيلم اللاصق البصري وأنابيب التفاعل بأغطية مناسبة.
4. قم بالطرد المركزي 96- من لوحة تفاعل البئر في جهاز طرد مركزي مزود بدوار لوحة ميكروتيتر لمدة 30 ثانية عند 2500 دورة في الدقيقة تقريبًا.
د- برمجة أداة PCR في الوقت الحقيقي
للحصول على المعلومات الأساسية المتعلقة بإعداد وبرمجة أجهزة PCR المختلفة في الوقت الفعلي ، يرجى الرجوع إلى دليل المستخدم الخاص بالأداة المعنية. تم تحسين الاختبار لنظام ABI7500 Real-Time PCR. يتم تنفيذ تشغيل PCR مع ظروف ركوب الدراجات كما هو موضح في الجدول أدناه.
رقم. | منصة | درجة الحرارة | مدة | دورات | جمع البيانات |
1 | رد فعل النسخ العكسي | 50 درجة | 10 دقائق | 1 | / |
2 | قبل التمسخ | 95 درجة | 30 ثانية | 1 | / |
3 | Dnaturation | 95 درجة | 10 ثوانى | 45 | / |
التلدين والتمديد | 58 درجة | 30 ثانية | جمع مضان نقطة النهاية |
تحديد كاشفات التألق
استهداف | اسم الكاشف | مراسل | Quencher |
COVID {0}} خاص RNA | الهدف ORF1ab الجين | مألوف | لا أحد |
الهدف من الجين N. | عرافة / مركز فيينا الدولي | لا أحد | |
الهدف E الجين | ROX | لا أحد | |
تحكم داخلي | جين مدبرة المنزل | Cy5 | لا أحد |
* يرجى تعيين المرجع الداخلي الفلوري للأداة على "لا شيء" ، على سبيل المثال: بالنسبة لأدوات سلسلة ABI ، اضبط "المرجع السلبي" على "بلا".
E. تحليل البيانات
يرجى تعيين معلمات التحليل وتحليل البيانات وفقًا لتعليمات التشغيل الخاصة بالأجهزة ذات الصلة.
خذ ABI 7500 كمثال:
يجب تعيين خط الأساس على نطاق يزيل تألق الخلفية الموجود في الدورات المبكرة للتضخيم ، ولكنه لا يتداخل مع المنطقة التي ترتفع فيها إشارات التضخيم فوق الخلفية (قيمة البداية: 3 ~ 10 ؛ القيمة النهائية: {{2} }). يجب أن يكون عتبة الدورة (Ct) في قاعدة المرحلة الأسية. انقر فوق "تحليل" للحصول على نتيجة التحليل تلقائيًا ، واقرأ نتيجة الكشف في نافذة "تقرير".
الوسم : Adenovirus سريع اختبار إفراز الأنف ، الصين ، الموردين ، الشركات المصنعة ، المصنع ، السائبة
إرسال التحقيق
قد يعجبك ايضا
